Dr. House handelt von einem Ärzteteam, das an einem Krankenhaus eine spezielle Diagnose-Einheit bildet und dabei Woche für Woche medizinische Rätsel lösen muss. Im Prinzip stellt die Serie eine Variation des Arzt-als-Detektiv-Schemas dar. Allerdings sind die Patienten in dieser Dramaserie (anders als bei diversen Produktionen, in denen Pathologen im Mittelpunkt stehen) noch am Leben.

Das Team muss die richtige Diagnose finden, um den jeweiligen Patienten – oft in einem Kampf gegen die Zeit – zu retten.

Leiter der Diagnosespezialisten ist Dr. Gregory House (Hugh Laurie, u.a. „Stuart Little“, 1999), der einen Stock als Gehhilfe benötigt, seit ein Muskelinfarkt in seinem rechten Oberschenkel zu spät erkannt wurde. House ist als Arzt ein Genie. Seine Art, mit Patienten umzugehen, ist hingegen reichlich unorthodox und gewöhnungsbedürftig: "Menschlichkeit wird überbewertet" ist einer der ersten Sätze, die wir von ihm hören. Am liebsten würde er nur von seinem Büro aus praktizieren, ohne jemals tatsächlich einen Patienten zu Gesicht zu bekommen.

Der eigenwillige und unkonventionelle Doktor hat eine Gruppe junger Fachleute um sich herum versammelt, von denen jeder ein Spezialist auf seinem Gebiet ist: Der Neurologe Dr. Eric Foreman (Omar Epps), die Immonologin Dr. Allison Cameron (Jennifer Morrison), der Intensivmediziner Dr. Robert Chase (Jesse Spencer) und Onkologe Dr. James Wilson (Robert Sean Leonard, „Der Club der toten Dichter“, 1989), der als einziger so etwas wie ein Freund von House ist.